1971年瑞典学者Engvail和Per Imann以及荷兰学者Van Weerman和Schuurs分别报道了将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫吸附测定法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）。ELISA作为免疫标记技术（包含免疫荧光技术，免疫放射技术，免疫酶技术和免疫胶体金技术）中的一种，已被广泛应用于科研和临床实验中，是定量生物分子（如肽、蛋白质、抗体和激素）的黄金标准技术。

　　ELISA的基本原理是将抗原（或抗体）结合到固相载体上，并将抗原（或抗体）与某种酶连接成酶标记抗原（或抗体），在检测时，将待检样本和酶标抗原（或抗体）按一定程序与固相载体上的抗原（或抗体）反应，然后用洗涤的方法去除未反应的部分，加入底物后，底物被结合在固相载体上的酶催化产生有色物质，通过酶标物显色的深浅间接反映被检抗原或者抗体的存在与否或者量的多少。

　　ELISA有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体，即免疫吸附剂；②酶标记的抗原或抗体，即标记物；③酶作用的底物，即显色剂。可用于检测抗原或抗体，根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检验方法，常见的有直接法、间接法、夹心法、竞争法。

　　用抗原（Ag）包被平板，并加入带有酶的一抗。当添加底物时，反应发生，并且与抗体-抗原相互作用的量成正比。

　　用已知抗原包被平板，待一抗与抗原结合后，加入与一抗体结合的二抗，二抗体包含与底物发生反应的酶。

　　夹心ELISA通常需要使用匹配的抗体对，其中每个抗体对抗原分子的不同、非重叠部分（表位）具有特异性。第一抗体（称为捕获抗体）被包被到孔中。然后将样品溶液加入孔中，第二抗体（称为检测抗体）遵循此步骤以测量样品的浓度。

　　也称为抑制ELISA，是一种基于表面/板的测定，板中涂有对感兴趣的分子具有反应性的捕获抗体。将样品（含有感兴趣的天然分子）和酶联重组蛋白（竞争分子）加入包被的孔中，潜伏期后，洗掉未结合的抗体。之后，将酶底物添加到每个孔中，转化为蓝色沉淀物，通过加入酸终止溶液使沉淀变成，并在450nm处读取沉淀的浓度以获得吸光度（OD值）。

　　ELISA检测肽、蛋白质、抗体和激素的多功能性以及生成定量和定性数据的能力使其成为最流行和最强大的免疫测定法之一，广泛应用于临床医学、生物技术、药理学和食品工业。

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